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Die bakteriellen Toxine, die die Rho-GTPasen modifizieren, haben den Rho-Isoformen

gegenüber alle eine unterschiedliche Substratspezifität. So modifizieren beispielsweise Toxin

A und B aus C. difficile Rho, Cdc42 und Rac. C3- Exoenzyme modifizieren RhoA, RhoB und

RhoC, nicht aber Rac und Cdc42 (Wilde, 2001). Eine besondere Substratspezifität hat das C3-

Exoenzym von S. aureus (C3stau2). Es modifiziert zusätzlich RhoE und Rnd3 (Wilde, 2002).

CNF und DNT modifizieren erwiesenermaßen Rho, Rac und Cdc42 (Lerm, 1999b; Masuda,

2002). Ihre Spezifität für die anderen Rho-Isoformen hingegen ist nicht bekannt. Die Kenntnis

der Substratspezifität ist für die Verwendung der bakteriellen Toxine zur Erforschung der

Rho-GTPasen notwendig.

Außer mit Hilfe von bakteriellen Toxinen können die Rho-GTPasen durch Mikroinjektion

dominant negativer und konstitutiv aktiver Mutanten der Rho-Proteine in Zellen erforscht

werden. Konstitutiv aktive Mutanten werden durch den Austausch der Aminosäuren 14 oder

63 hergestellt, durch den es zum Verlust der GTPase-Aktivität kommt. In dominant negativen

Mutanten ist die Aminosäure 19 ausgetauscht. Diese Mutation bewirkt, dass die GTPase

aufgrund einer geringeren GTP/GDP-Affinität keine Effekte mehr vermitteln kann, aber

trotzdem mit endogenen GTPasen um GEFs konkurriert. So blockieren die dominant

negativen Mutanten die Effekte der entsprechenden Rho-GTPase. Auch mit Hilfe von siRNA

(small interfering RNA) können endogene Rho-GTPasen spezifisch ausgeschaltet werden

(Simpson, 2004).

Die Etablierung neuer Methoden mit höherer Spezifität für einzelne Rho-Isoformen ist in

Zukunft eine wichtige Aufgabe.

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